說明
GeneClip™ U1 Hairpin Cloning Systems(GeneClip™ U1 發(fā)夾克隆系統(tǒng)) 由線性質粒組成,這些質粒是為了在人類細胞中快速、簡便地克隆人類目的序列,來表達短發(fā)夾RNAs(shRNAs) 而設計的。轉染至人類細胞中后,從包含U1 RNA 聚合酶啟動子和siRNA 模板的DNA 質?捎行У剡M行短干擾RNAs(siRNAs) 的體內表達。U1啟動子通常用于體外成功地產(chǎn)生發(fā)夾siRNAs。
為使發(fā)夾siRNA 插入pGeneClip™ 載體,將2 個短DNA 寡核苷酸退火,形成包含該發(fā)夾siRNA 的目的序列的DNA 插入物。退火后,寡核苷酸形成與pGeneClip™ Vector 末端匹配的突出末端,便于粘性末端連接。一經(jīng)轉染,RNA 聚合酶II 即在體內轉錄發(fā)夾插入序列,生成發(fā)夾siRNAs。
特點 • 更多載體選擇:這些系統(tǒng)提供的載體含有各種用于穩(wěn)定轉染真核細胞的抗生素抗性選擇標記物,或用于確定轉染效率的hMGFP。
• 節(jié)省時間:載體以預消化的形式提供以減少載體制備的時間。
• 便利:每個系統(tǒng)都包含T4 DNA 連接酶, 2X 快速連接緩沖液, 寡核苷酸退火緩沖液和pGeneClip™ 載體。
• 輕松鑒定目的克。菏褂肞stI 酶切快速鑒定陽性重組體。
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