說明 pRL 家族是野生型海腎螢光素酶(Rluc) 報告基因對照載體。pRL 載體提供組成型表達的海腎螢光素酶,可與一個螢火蟲螢光素酶載體聯(lián)合共轉染哺乳動物細胞。海腎螢光素酶的表達為實驗的螢火蟲螢光素酶報告基因正態(tài)化提供內對照值。pRL 載體包含一個編碼海腎螢光素酶(Rluc) 的cDNA, 這個cDNA 從珊瑚蟲類腔腸動物海腎(Renilla reniformis) 中克隆而來。目前有四個不同的啟動子構造。其中HSV- 胸腺嘧啶核苷激酶啟動子(pRL-TK) 相對較弱, 更適用于海腎螢光素酶報告基因載體的中性組成型表達。早期SV40 增強子/ 啟動子區(qū)域(pRL-SV40) 和CMV 極早期增強子/ 啟動子區(qū)域(pRL-CMV)一般提供高水平轉錄,因此可能不適于作為實驗載體帶有強調控元件的共報告基因。一般我們建議在將要應用的目標細胞中驗證某一個特定共報告基因的性能。除了經(jīng)過修飾的Rluc 報告基因外,所有pRL載體均是從dam–/dcm– E. coli K 宿主菌株分離而來,這樣可以使用對dam 或 dcm 甲基化敏感的限制性內切酶進行消化。 特點 • T7 啟動子緊鄰Rluc 的上游,可在體外合成海腎螢光素酶。 • SV40 late poly(A) 信號序列位于Rluc 下游,確保轉錄的終止和mRNA 的多聚腺苷酸化。 • 原核復制起始區(qū)和β- 內酰胺酶基因可進行pRL 載體在E. coli 宿主菌株內的繁殖篩選。 • 為了避免DNA 甲基化,所有pRL 載體均從dam–/dcm– E. coli K宿主菌株中分離而來。