說(shuō)明 雙雜交系統(tǒng)是用于體內(nèi)蛋白與蛋白相互作用檢測(cè)的極為有力的工具。此系統(tǒng)的基礎(chǔ)是某些轉(zhuǎn)錄因子中的模塊結(jié)構(gòu)域:即一種能夠結(jié)合特異DNA 序列的DNA 結(jié)合區(qū)結(jié)構(gòu)域和一種能夠與基礎(chǔ)轉(zhuǎn)錄元件相互作用的轉(zhuǎn)錄激活結(jié)構(gòu)域。與DNA 結(jié)合結(jié)構(gòu)域相關(guān)的轉(zhuǎn)錄激活結(jié)構(gòu)域?qū)⒋龠M(jìn)RNA 聚合酶II 復(fù)合體在TATA 盒的組裝并增加轉(zhuǎn)錄。在CheckMate™ Mammalian Two-Hybrid System (CheckMate™ 哺乳動(dòng)物雙雜交系統(tǒng)中), DNA 結(jié)合結(jié)構(gòu)域與轉(zhuǎn)錄激活結(jié)構(gòu)域由不同的質(zhì)粒產(chǎn)生,當(dāng)一個(gè)融合在DNA 結(jié)合結(jié)構(gòu)域的蛋白("X") 與第二個(gè)融合在轉(zhuǎn)錄激活結(jié)構(gòu)域上的蛋白("Y") 相互作用時(shí),二者緊密相關(guān)。此系統(tǒng)中,蛋白X 和Y 的相互作用引起報(bào)告基因的轉(zhuǎn)錄。 特點(diǎn) .哺乳動(dòng)物細(xì)胞系統(tǒng):可在選擇的細(xì)胞系內(nèi)進(jìn)行蛋白相互作用研究。此處使用的蛋白更接近于其天然構(gòu)象。翻譯后修飾( 諸如 糖基化、磷酸化和乙酰化) 等功能均被更好地保留。 • 易于定量:可使用Dual-Luciferase® 檢測(cè)系統(tǒng)進(jìn)行定量檢測(cè)。 • 有內(nèi)對(duì)照:海腎螢光素酶可對(duì)轉(zhuǎn)染效率進(jìn)行歸一化處理。 • 快速的瞬時(shí)檢測(cè):轉(zhuǎn)染后2 天即可得到結(jié)果,酵母系統(tǒng)則需要3-4 天。 • 穩(wěn)定轉(zhuǎn)染:pACT 載體帶有新霉素磷酸基轉(zhuǎn)移酶基因,能夠用于穩(wěn)定轉(zhuǎn)染的篩選。