說明 凝膠遷移或電泳遷移率檢測(cè)是一種用于檢測(cè)DNA 結(jié)合蛋白的簡(jiǎn)單而快速的方法。這種方法被廣泛用于序列特異DNA 結(jié)合蛋白的研究,如轉(zhuǎn)錄因子。該檢測(cè)基于蛋白和DNA 的復(fù)合體在非變性聚丙烯酰氨凝膠中的遷移速率大大低于DNA 片段或雙鏈寡核苷酸的遷移速率。凝膠遷移實(shí)驗(yàn)首先是將純化蛋白或蛋白混合物( 如核或細(xì)胞提取物) 與32P 末端標(biāo)記的可能含有蛋白結(jié)合位點(diǎn)的DNA 片段共同孵育。然后用非變性聚丙烯酰氨凝膠分析反應(yīng)產(chǎn)物。使用未標(biāo)記的DNA 片段或含有目的蛋白結(jié)合位點(diǎn)的寡核苷酸或其它無(wú)關(guān)的DNA 序列進(jìn)行競(jìng)爭(zhēng)性實(shí)驗(yàn),來(lái)確定DNA 結(jié)合蛋白假定結(jié)合位點(diǎn)的特異性。 Core System (Cat.# E3050,核心系統(tǒng)) 包含HeLa Nuclear Extract、SP1 和AP2 Consensus Oligos,可以作為陽(yáng)性對(duì)照,是經(jīng)過凝膠遷移實(shí)驗(yàn)檢驗(yàn)的可靠系統(tǒng)。另外,核心系統(tǒng)還包含T4 多聚核苷酸激酶和Kinase 10X buffer 用于標(biāo)記寡核苷酸,以及Gel ShiftBinding 5X Buffer。E3300 包含以上所有組分,此外,還包括AP1、OCT1、CREB、NF-kB 和 TFIID 結(jié)合的共有寡核苷酸。 特點(diǎn) . 陽(yáng)性對(duì)照:核心系統(tǒng)包括HeLa 細(xì)胞核提取物及AP2 和SP1 共有寡核苷酸。 • 通用:寡核苷酸可以5` 末端標(biāo)記,并用作蛋白特異探針或在競(jìng)爭(zhēng)性實(shí)驗(yàn)中用作非標(biāo)記的寡核苷酸。