說(shuō)明 無(wú)啟動(dòng)子的螢火蟲(chóng)螢光素酶載體主要是用來(lái)鑒定控制基因轉(zhuǎn)錄的重要區(qū)域中的可能的啟動(dòng)子元件。我們提供含有三種經(jīng)過(guò)改造的不同螢火蟲(chóng)螢光素酶基因(luc2, luc2P 或luc2CP) 的無(wú)啟動(dòng)子載體。luc2 基因經(jīng)過(guò)改造,去除了大部分隱藏的轉(zhuǎn)錄因子結(jié)合位點(diǎn),并通過(guò)編碼優(yōu)化提高了在哺乳動(dòng)物細(xì)胞中的表達(dá)效率。luc2P、luc2CP 和RapidResponse™ 基因是在luc2 基因的基礎(chǔ)上增加了降解序列,從而可以調(diào)控luc2 基因在細(xì)胞中的半衰期。RapidResponse™ 基因?qū)Υ碳さ捻憫?yīng)更快,但是以犧牲信號(hào)強(qiáng)度為代價(jià)。luc2P 基因( 半衰期為1 個(gè)小時(shí)) 反應(yīng)比luc2 基因( 半衰期為3 個(gè)小時(shí)) 快,信號(hào)強(qiáng)度也適合,而luc2CP 基因( 半衰期為0.4 個(gè)小時(shí)) 反應(yīng)更快但信號(hào)強(qiáng)度最弱。這些無(wú)啟動(dòng)子載體含有不同選擇標(biāo)簽(hygromycin( 潮霉素)、neomycin ( 新霉素) 或puromycin( 嘌呤霉素)) 和不含選擇標(biāo)簽的可供訂購(gòu) 特點(diǎn) • 基于以下原因擁有更好的靈敏度和生物相關(guān)性: • 報(bào)告基因表達(dá)更高:為了更適于哺乳動(dòng)物細(xì)胞的表達(dá),將合成的基因密碼子更加優(yōu)化。 • 降低了表達(dá)產(chǎn)物的背景和危險(xiǎn):去掉了隱藏的DNA 調(diào)控元件和轉(zhuǎn)錄因子結(jié)合位點(diǎn)。 • 瞬時(shí)應(yīng)答更快:Rapid Response™ 技術(shù)應(yīng)用了去穩(wěn)定螢光素酶基因。其它的優(yōu)勢(shì)包括: • 更靈活的檢測(cè)選擇:可隨意選擇合成luc2 (Photinus pyralis ) 或hRluc (Renilla reniformis ) 報(bào)告基因。 • 可輕松地從瞬時(shí)轉(zhuǎn)換到穩(wěn)定細(xì)胞:有多種哺乳動(dòng)物細(xì)胞選擇標(biāo)記可供選擇。 • 可輕松在載體間轉(zhuǎn)移:具有常用的多克隆位點(diǎn)和獨(dú)特的SfiI 轉(zhuǎn)移設(shè)計(jì)。