說(shuō)明  
 構(gòu)建一個(gè)可以檢測(cè)某一功能信號(hào)通路的細(xì)胞系，可以有助于解譯參與這一信號(hào)通路的信號(hào)分子。這些工具載體是通過(guò)在載體的最小啟動(dòng)子的上游插入多個(gè)反應(yīng)元件重復(fù)序列而獲得的。我們提供含有三種經(jīng)過(guò)改造的不同螢火蟲(chóng)螢光素酶基因(luc2 、luc2P 或luc2CP)的最小啟動(dòng)子載體。luc2 基因經(jīng)過(guò)改造，去除了大部分隱藏的轉(zhuǎn)錄因子結(jié)合位點(diǎn)，并通過(guò)編碼優(yōu)化提高了在哺乳動(dòng)物細(xì)胞中的表達(dá)效率。luc2P、luc2CP 和RapidResponse™  基因是在luc2 基因的基礎(chǔ)上增加了降解序列，從而可以調(diào)控luc2 基因在細(xì)胞中的半衰期。RapidResponse™  基因?qū)Υ碳さ捻憫?yīng)更快，但是以犧牲信號(hào)強(qiáng)度為代價(jià)。luc2P 基因( 半衰期為1 個(gè)小時(shí)) 反應(yīng)比luc2 基因( 半衰期為3 個(gè)小時(shí)) 快，信號(hào)強(qiáng)度也適合，而luc2CP 基因( 半衰期為0.4個(gè)小時(shí)) 反應(yīng)更快但信號(hào)強(qiáng)度最弱。最小啟動(dòng)子載體有含選擇標(biāo)簽(hygromycin，潮霉素) 和不含選擇標(biāo)簽的可供訂購(gòu)。為了提高實(shí)驗(yàn)效率，一些預(yù)設(shè)計(jì)的反應(yīng)元件載體已經(jīng)整合到了pGL4.27 載體中。其中一些載體也可訂購(gòu)其穩(wěn)定表達(dá)的細(xì)胞系。
特點(diǎn)    • 基于以下原因擁有更好的靈敏度和生物相關(guān)性：
• 報(bào)告基因表達(dá)更高：為了更適于哺乳動(dòng)物細(xì)胞的表達(dá)，將合成的基因密碼子更加優(yōu)化。
• 降低了表達(dá)產(chǎn)物的背景和危險(xiǎn)：去掉了隱藏的DNA 調(diào)控元件和轉(zhuǎn)錄因子結(jié)合位點(diǎn)。
• 瞬時(shí)應(yīng)答更快：Rapid Response™ 技術(shù)應(yīng)用了去穩(wěn)定螢光素酶基因。
其它的優(yōu)勢(shì)包括：
• 更靈活的檢測(cè)選擇：可隨意選擇合成luc2 (Photinus pyralis ) 或hRluc (Renilla reniformis ) 報(bào)告基因。
• 可輕松地從瞬時(shí)轉(zhuǎn)換到穩(wěn)定細(xì)胞：有多種哺乳動(dòng)物細(xì)胞選擇標(biāo)記可供選擇。
• 可輕松在載體間轉(zhuǎn)移：具有常用的多克隆位點(diǎn)和獨(dú)特的SfiI 轉(zhuǎn)移設(shè)計(jì)。