說明 構建一個可以檢測某一功能信號通路的細胞系，可以有助于解譯參與這一信號通路的信號分子。這些工具載體是通過在載體的最小啟動子的上游插入多個反應元件重復序列而獲得的。我們提供含有三種經(jīng)過改造的不同螢火蟲螢光素酶基因(luc2 、luc2P 或luc2CP)的最小啟動子載體。luc2 基因經(jīng)過改造，去除了大部分隱藏的轉錄因子結合位點，并通過編碼優(yōu)化提高了在哺乳動物細胞中的表達效率。luc2P、luc2CP 和RapidResponse™ 基因是在luc2 基因的基礎上增加了降解序列，從而可以調控luc2 基因在細胞中的半衰期。RapidResponse™ 基因對刺激的響應更快，但是以犧牲信號強度為代價。luc2P 基因( 半衰期為1 個小時) 反應比luc2 基因( 半衰期為3 個小時) 快，信號強度也適合，而luc2CP 基因( 半衰期為0.4個小時) 反應更快但信號強度最弱。最小啟動子載體有含選擇標簽(hygromycin，潮霉素) 和不含選擇標簽的可供訂購。為了提高實驗效率，一些預設計的反應元件載體已經(jīng)整合到了pGL4.27 載體中。其中一些載體也可訂購其穩(wěn)定表達的細胞系。 特點 • 基于以下原因擁有更好的靈敏度和生物相關性： • 報告基因表達更高：為了更適于哺乳動物細胞的表達，將合成的基因密碼子更加優(yōu)化。 • 降低了表達產(chǎn)物的背景和危險：去掉了隱藏的DNA 調控元件和轉錄因子結合位點。 • 瞬時應答更快：Rapid Response™ 技術應用了去穩(wěn)定螢光素酶基因。 其它的優(yōu)勢包括： • 更靈活的檢測選擇：可隨意選擇合成luc2 (Photinus pyralis ) 或hRluc (Renilla reniformis ) 報告基因。 • 可輕松地從瞬時轉換到穩(wěn)定細胞：有多種哺乳動物細胞選擇標記可供選擇。 • 可輕松在載體間轉移：具有常用的多克隆位點和獨特的SfiI 轉移設計。