說(shuō)明
Tryptase ( 類(lèi)胰蛋白酶) 是肥大細(xì)胞顆粒中的主要蛋白,它可以在精胺酸和賴(lài)氨酸殘基處剪切肽鏈。類(lèi)胰蛋白酶在肥大細(xì)胞顆粒中的儲(chǔ)存和釋放依賴(lài)于激活效應(yīng)。重組人表皮βI 類(lèi)胰蛋白酶(rhSkin β Tryptase) 與重組人肺βII 類(lèi)胰蛋白酶(rhLung β Tryptase) 均是中性絲氨酸蛋白酶。人源β 類(lèi)胰蛋白酶已被成功克隆,并在畢赤酵母(Pichia pastoris ) 中表達(dá),為具有活性的四聚體酶,經(jīng)親和層析純化。這兩種酶有不同的緩沖液配方、酶濃度和糖基化特征。提供的rhLung Tryptase 溶于緩沖能力很低但濃度很高(2mg/ml) 的緩沖液中,不含肝素,用于色譜分析。將這兩種重組酶連同天然的肺類(lèi)胰蛋白酶進(jìn)行糖苷酶消化,然后使用Western 分析,結(jié)果顯示rhLung Tryptase 的糖基化特征與尸酶非常相似。
特異活性: 以 0.4mM Nα CBZ-L- 賴(lài)氨酸硫代苯酯作底物, 與 Ellman`s Reagent (5,5`-Dithio-bis(5-Nitrobenzoic Acid)) 共同應(yīng)用時(shí),在 1ml 的最終體積下,檢測(cè)水解率,在 25 ℃ 條件下孵育 1 分鐘 , 檢測(cè) 410nm 處的吸光度值。 1 個(gè)酶單位定義為每分鐘 1.0 個(gè)吸光度值的變化。
• rhSkin β 類(lèi)胰蛋白酶 >1,000 u/mg 蛋白。
• rhLung β 類(lèi)胰蛋白酶 >1,200u/mg 蛋白。濃度:
• rhSkin β 類(lèi)胰蛋白酶: 200μg/ml ;
• rhLung β 類(lèi)胰蛋白酶: 2mg/ml 。
特點(diǎn) . 活性具有高特異性:比野生型的肺類(lèi)胰蛋白酶高出130-150%。
• 結(jié)果一致:重組蛋白的表達(dá)可確保不同批次的酶均衡一致。
• 安全:避免接觸與野生型尸體類(lèi)胰蛋白酶相關(guān)的人類(lèi)病原體。
• 純度高:表皮類(lèi)胰蛋白酶β 和肺類(lèi)胰蛋白酶β 不含其它污染蛋白質(zhì),每毫克蛋白酶活力高,避免野生型胰蛋白酶與外源蛋白相互作用。
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