在細(xì)胞培養(yǎng)中使用氨基酸進(jìn)行穩(wěn)定的同位素標(biāo)記（SILAC）是鑒定和定量復(fù)雜蛋白樣品中相關(guān)差異的變化的一種有效的方法。SILAC方法通過(guò)體內(nèi)代謝將“重的”13C-或15N標(biāo)記的氨基酸整合到蛋白中然后進(jìn)行質(zhì)譜（MS）分析以便加快對(duì)蛋白的測(cè)定、鑒定、定量和理解。
應(yīng)用：
可以使用專門針對(duì)干細(xì)胞的試劑盒對(duì)干細(xì)胞分化中的蛋白進(jìn)行鑒定。
可以對(duì)不同細(xì)胞處理后的蛋白豐度的相關(guān)變化進(jìn)行定量的分析。
可以對(duì)沒(méi)有抗體的蛋白進(jìn)行定量分析。
正常細(xì)胞vs.疾病細(xì)胞的蛋白表達(dá)譜的繪制。
可以在一個(gè)實(shí)驗(yàn)中對(duì)成千上萬(wàn)的蛋白進(jìn)行鑒定和定量。
產(chǎn)品特點(diǎn)：
標(biāo)記物能夠100%的整合到活細(xì)胞的蛋白中。
可重復(fù) – 降低由于樣品制備不同而造成的實(shí)驗(yàn)內(nèi)差異。
靈活 – 培養(yǎng)基中缺乏L-賴氨酸和L-精氨酸兩種氨基酸，因此可以通過(guò)兩種氨基酸的同位素標(biāo)記更加完全的覆蓋整個(gè)蛋白質(zhì)組。
通用 – 可以對(duì)多種在DMEM或RPMI 1640培養(yǎng)基中能夠培養(yǎng)的哺乳動(dòng)物細(xì)胞中表達(dá)的蛋白進(jìn)行標(biāo)記，這些細(xì)胞包括HeLa，293T，COS7，U2OS，A549，A431，HepG2，NIH 3T3，Jurkat及其它。
兼容– 可以通過(guò)分化培養(yǎng)基測(cè)定人間質(zhì)干細(xì)胞或小鼠胚胎干細(xì)胞中調(diào)節(jié)發(fā)育的重要蛋白。
SILAC需要在含有輕或重的必需氨基酸的培養(yǎng)基中培養(yǎng)哺乳動(dòng)物細(xì)胞；例如，分別含有12C6及13C6 L-賴氨酸。常規(guī)的實(shí)驗(yàn)包括在含有輕氨基酸（對(duì)照）的培養(yǎng)基中培養(yǎng)一批細(xì)胞，同時(shí)在含有重氨基酸（實(shí)驗(yàn)組）的培養(yǎng)基中培養(yǎng)相同的另一批細(xì)胞。輕、重氨基酸通過(guò)自然的細(xì)胞內(nèi)蛋白合成的過(guò)程整合到蛋白中。在對(duì)一個(gè)樣品進(jìn)行化學(xué)處理或者遺傳操作使其蛋白質(zhì)組發(fā)生變化之后，將從兩種細(xì)胞中得到的蛋白等量的混合在一起，然后利用SDS聚丙烯酰胺凝膠電泳進(jìn)行分離并利用胰酶進(jìn)行消化然后進(jìn)行MS分析。由于標(biāo)記有重和輕氨基酸的多肽在化學(xué)性質(zhì)上是完全相同的，因此這兩種多肽在反相柱洗脫時(shí)是同時(shí)洗脫的，因此能夠在MS分析中同時(shí)檢測(cè)到兩種多肽。然后就可以利用來(lái)自于每種蛋白的同位素標(biāo)記的多肽的相
對(duì)峰強(qiáng)度來(lái)確定處理后的樣品的蛋白豐度的變化。（見(jiàn)下圖）我們提供幾種不同的Thermo Scientific Pierce SILAC試劑盒，還提供能夠支持不同類型的哺乳動(dòng)物細(xì)胞系生長(zhǎng)的培養(yǎng)基，這些細(xì)胞系甚至包括人間質(zhì)干細(xì)胞和小鼠胚胎干細(xì)胞。每個(gè)試劑盒都包括同位素標(biāo)記細(xì)胞所需的所有試劑，這些試劑包括培養(yǎng)基、重和輕氨基酸對(duì)以及透析過(guò)的血清。幾種同位素標(biāo)記的賴氨酸和精氨酸都是單獨(dú)提供的，因此可以進(jìn)行多重實(shí)驗(yàn)和分析。當(dāng)與Thermo Scientific蛋白/多肽樣品富集產(chǎn)品結(jié)合使用時(shí)，可以使用Pierce SILAC蛋白定量試劑盒對(duì)低豐度蛋白進(jìn)行MS分析，這些低豐度蛋白包括細(xì)胞表面蛋白、細(xì)胞器特異性蛋白以及磷酸化蛋白或糖蛋白這些經(jīng)過(guò)翻譯后修飾的蛋白。