SuperScript III Reverse Transcriptase
SuperScript III 反轉(zhuǎn)錄酶 (RT) (SuperScript® III Reverse Transcriptase (RT)) 是 SuperScript® II RT 的專有突變體，在 50°C 具有活性，半衰期為 220 分鐘，使用基因特異性引物 (GSP) 提高特異性，在所有 RT 中 cDNA 產(chǎn)量最高。 如果要進(jìn)行特定基因的 RT-PCR 或從總 RNA 或 poly (A)+ RNA 樣品生成 cDNA，該產(chǎn)品十分理想。 和 SuperScript® II 一樣，它可以從單鏈 RNA、DNA 或 RNA:DNA 雜合體合成互補(bǔ) DNA 鏈。 通過引入點(diǎn)突變對 SuperScript® III RT 進(jìn)行遺傳改造，這些點(diǎn)突變可以增加半衰期、降低 RNase 活性并增加熱穩(wěn)定性。 進(jìn)行結(jié)構(gòu)修飾后：
•50°C 時(shí)半衰期為 220 分鐘，獲得最高的 cDNA 產(chǎn)量（圖 1）
•RNase H 活性降低，獲得更多全長 cDNA
•在 50°C 有最大活性，用 GSP 增加特異性
•能增加 RT 單位而不抑制后續(xù)的 PCR
應(yīng)用： 第一鏈 cDNA 合成、陣列標(biāo)記、cDNA 文庫、RT-PCR、引物延伸和 3´ 和 5´ RACE。
來源： 純化自表達(dá) M-MLV 的 pol 基因的大腸桿菌 (1,2)，通過突變增加了熱穩(wěn)定性和半衰期，降低了 RNase H 活性。
性能和質(zhì)量測試： SDS-PAGE 純度；脫氧核糖核酸內(nèi)切酶、脫氧核糖核酸外切酶和核糖核酸酶分析（圖 2）及 cDNA 產(chǎn)物的產(chǎn)量和長度。
單位定義： 一個(gè)單位的 SuperScript® III RT 是在 37°C 的反應(yīng)體系中，使用 poly(A)•oligo(dT)12-18 作為模板•引物，在 10 分鐘內(nèi)將 1 納摩爾脫氧核糖核苷酸摻入酸沉淀材料所需的酶量 (3)。
單位反應(yīng)條件： 50 mM Tris-HCl (pH 8.3)、40 mM KCl、6 mM MgCl 2、1 mM DTT。 0.5 更看更多mM [ 3 H]dTTP、0.1 mM poly(A)、0.1 mM oligo(dT)12-18、0.1 mg/ml BSA 和酶，共 50 µl，溫度 37°C，時(shí)間 10 分鐘。