QuantiTect Rev. Transcription Kit快速合成cDNA,用于兩步法real-time RT-PCRcDNA合成和gDNA去除僅用20分鐘完成有效去除基因組DNA,無需設(shè)計RNA特異性引物或探針高特異性,即便是低豐度的轉(zhuǎn)錄本也能獲得高產(chǎn)量的cDNA轉(zhuǎn)錄本的5' 和3' 端區(qū)域都可以進行cDNA 合成 為獲得準確的real-time RT-PCR基因表達分析結(jié)果,很重要的是僅擴增和檢測cDNA。基因組DNA的干擾可通過設(shè)計橫跨外顯子/外顯子邊界的引物或探針避免。盡管如此,在某些特殊情況下(如:cDNA來自一個單外顯子基因),起始RNA樣品必須無基因組DNA。 使用QuantiTect Reverse Transcription Kit,基因組DNA污染物可使用獨特的gDNA去除緩沖液迅速有效的去除(見圖:“高效去除基因組DNA,確保精確的Real-Time RT-PCR”)。因為純化RNA樣品后無需另外采用DNA酶消化,從而可節(jié)省時間和費用。并且也無需設(shè)計RNA特異性引物和探針。 低豐度轉(zhuǎn)錄本獲得更高產(chǎn)量的cDNA 操作流程使用QuantiTect逆轉(zhuǎn)錄試劑盒可在20分鐘內(nèi)去除基因組DNA和合成cDNA(見流程圖)。由于兩個反應(yīng)均在同一孵育溫度并使用預(yù)混液構(gòu)建反應(yīng),因此操作過程快速且方便。相反,供應(yīng)商I提供的試劑盒操作需更多移液步驟且經(jīng)常需要調(diào)整孵育溫度,因此需要更長時間和更多手動操作。 應(yīng)用QuantiTect Reverse Transcription Kit可從各種類型的起始樣品中合成cDNA以實現(xiàn)高效和高靈敏度的real-time RT-PCR,包括激光顯微切割樣品和活組織切片樣品。與其他供應(yīng)商提供的試劑相比,QuantiTect Reverse Transcription Kit在檢測低豐度基因時具有更高的靈敏度(見圖:“Real-Time,兩步法RT-PCR精確度更高”)。 為獲得高特異性和高靈敏度的real-time RT-PCR結(jié)果,又避免耗時的反應(yīng)步驟優(yōu)化過程,我們推薦QuantiTect Reverse Transcription Kit和其他QuantiTect產(chǎn)品聯(lián)合使用。包括經(jīng)優(yōu)化的PCR反應(yīng)預(yù)混液和即用型引物,使用SYBR Green染料法或序列特異性探針法進行 real-time RT-PCR。