QuantiTect SYBR® Green RT-PCR Kit
使用SYBR Green I進(jìn)行一步法定量RT-PCR，用于基因表達(dá)分析
一步法RT-PCR具有高特異性
可靠定量檢測低豐度轉(zhuǎn)錄本
準(zhǔn)確定量檢測各種起始量樣本
無需優(yōu)化反應(yīng)和循環(huán)條件
QuantiTect SYBR Green RT-PCR Kit使用SYBR Green I通過一步法real-time RT-PCR對RNA目標(biāo)序列進(jìn)行高特異性的定量檢測。熱啟動和獨(dú)特的實(shí)時定量PCR緩沖液確保了對RNA目標(biāo)序列高特異性和靈敏度的real-time定量檢測。dNTP混合液含有dUTP，可選擇性進(jìn)行UNG處理。QuantiTect SYBR Green RT-PCR Kit還含有優(yōu)化的RT混合液，可對多種起始量的模板RNA進(jìn)行高效、靈敏的逆轉(zhuǎn)錄。為便于使用，預(yù)混液可儲存在2–8°C。
性能
QuantiTect SYBR Green RT-PCR Kit含有獨(dú)特的逆轉(zhuǎn)錄酶，可高效、靈敏的進(jìn)行cDNA合成在寬泛的范圍內(nèi)符合線性規(guī)律（參見Comparable results in one-step and two-step RT-PCR）。HotStarTaq DNA Polymerase提供嚴(yán)格的熱啟動，進(jìn)一步提高了PCR反應(yīng)的特異性（參見Highly specific amplification）。
原理
QuantiTect SYBR Green RT-PCR Kits含有優(yōu)化的即用型預(yù)混液，可使用SYBR Green I對RNA靶序列進(jìn)行高特異性和靈敏度的real-time定量分析。預(yù)混液中的熒光染料SYBR Green I可對很多不同的靶序列進(jìn)行分析，無需合成靶標(biāo)特異性標(biāo)記引物。獨(dú)特的PCR緩沖液含有K+和NH4+離子，能促使特異性引物退火，獲得高RT-PCR特異性和靈敏度（參見Specific primer annealing）。此外，HotStarTaq DNA Polymerase具有嚴(yán)格的熱啟動，可防止非特異性產(chǎn)物的形成。
QuantiTect SYBR Green RT-PCR預(yù)混液含有dUTP，可在PCR前使用尿嘧啶DNA糖基化酶（UNG）預(yù)處理，保證之前反應(yīng)殘留的PCR產(chǎn)物不會影響后續(xù)的PCR反應(yīng)。
2x QuantiTect SYBR Green RT-PCR Kit的組分
操作流程
QuantiTect SYBR Green RT-PCR Kit無需進(jìn)行繁瑣耗時的反應(yīng)條件優(yōu)化。只需簡單地將引物和模板加入到即用型RT-PCR預(yù)混液中，即可開始反應(yīng)（參見One-step RT-PCR）。使用操作手冊中的實(shí)驗(yàn)方案可在任何real-time PCR儀上得到快速、可靠的結(jié)果。如果需要，反應(yīng)液可用尿嘧啶DNA糖基化酶（UNG）預(yù)處理，以去除之前反應(yīng)殘留的PCR產(chǎn)物。
QuantiTect SYBR Green RT-PCR Kits配合QuantiTect Primer Assays可在基因表達(dá)分析中獲得高度特異性的結(jié)果�；蚪M范圍、生物信息學(xué)驗(yàn)證的引物對覆蓋所有人類、小鼠、大鼠和其他各類生物基因。QuantiTect Primer Assays可在GeneGlobe網(wǎng)站上方便地訂購。
應(yīng)用
QuantiTect SYBR Green RT-PCR Kit可用在各種real-time PCR儀上對cDNA目標(biāo)序列進(jìn)行基因表達(dá)分析，包括Applied Biosystems、Bio-Rad、Cepheid、Eppendorf、Roche和Agilent的儀器。在Rotor-Gene Q實(shí)時熒光定量PCR分析儀上使用時，我們推薦專門為快速PCR研發(fā)的Rotor-Gene SYBR Green RT-PCR Kit。