miScript II RT Kit
使用miScript PCR System，對(duì)包含miRNA的總RNA進(jìn)行逆轉(zhuǎn)錄
靈敏和特異性的檢測(cè)miRNA
利用單一cDNA定量檢測(cè)多種miRNA
利用同一cDNA定量檢測(cè)miRNA和mRNA
利用同一cDNA定量檢測(cè)成熟miRNA和miRNA前體
專有技術(shù)合成RNA，評(píng)估逆轉(zhuǎn)錄效率
miScript II RT Kit是miScript PCR System的重要組成部分，用于miRNA定量檢測(cè)。配合miScript SYBR Green PCR Kit和miScript PCRarrays（miRNome或Pathway-Focused miScript miRNA PCR Arrays）或所需的檢測(cè)（用于miRNA或其他非編碼RNA的miScript Primer Assays、用于miRNA前體的miScript Precursor Assays或用于mRNA的QuantiTect Primer Assays），miScript II RT Kit合成的cDNA可作為real-time PCR 的模板。
性能
miScript II RT Kit配合miScript PCR System的其他組分，靈敏和特異性地檢測(cè)并定量miRNA。由于許多miRNA表達(dá)水平低，靈敏度特別重要，以確保數(shù)據(jù)的可靠。miScript PCR System靈敏度高、動(dòng)態(tài)范圍廣和持續(xù)高擴(kuò)增率。其卓越的性能使得初次嘗試時(shí)即可獲得高度重復(fù)性結(jié)果（參見Reproducible results in technical and biological replicates）。
高特異性
miRNAs存在許多miRNA亞型家族，有些只是單個(gè)堿基的不同。這使得miRNA定量面臨很大挑戰(zhàn)。miScript PCR System可有效識(shí)別緊密相關(guān)的miRNA亞型，即使是只有單個(gè)堿基不同的miRNA也可（見表）。
miScript PCR System的特異性
原理
miScript PCR System應(yīng)用SYBR Green-based real-time PCR，能夠靈敏和特異性地進(jìn)行miRNA的定量和譜分析。miScript PCR System可以完成從RNA中合成cDNA及后續(xù)的real-time PCR檢測(cè)miRNAs涉及的所有步驟。
miScript PCR System包含以下組分：
miScript II RT Kit，可簡(jiǎn)單、單步合成cDNA。單個(gè)cDNA合成反應(yīng)可用于檢測(cè)數(shù)以百計(jì)的miRNAs。雙緩沖體系滿足使用real-time PCR進(jìn)行miRNA定量的獨(dú)特要求。
miScript SYBR Green PCR Kit，包含QuantiTect SYBR Green PCR Master Mix和反向引物miScript Universal Primer，配合miScript Primer Assay或miScript miRNA PCR Array進(jìn)行miRNAs檢測(cè)。
miScript Primer Assay或miScript Precursor Assay，前者為miRNA特異性正向引物，用于檢測(cè)成熟miRNAs。后者包含正向和反向引物，靶向作用于miRNA前體的頸環(huán)序列。該產(chǎn)品使用miRBase中的最新序列信息設(shè)計(jì)。
miScript miRNA PCR Array，miRNome或Pathway-Focused miScript miRNA PCR Arrays被預(yù)先設(shè)定，單次使用的PCR孔板/孔盤可快速分析成熟miRNAs。
miScript miRNA PCR Array data analysis tool，免費(fèi)的基于網(wǎng)絡(luò)的工具，簡(jiǎn)化了用于miScript miRNA PCR Arrays相對(duì)定量的ΔΔCT方法。
miScript II RT Kit雙緩沖體系
miScript II RT Kit包含miScript Reverse Transcriptase Mix、10x miScript Nucleics Mix、5x miScript HiSpec Buffer和5x miScript HiFlex Buffer。miScript Reverse Transcriptase Mix是一種經(jīng)優(yōu)化的poly(A)聚合酶和逆轉(zhuǎn)錄酶混合物。miScript Nucleics Mix包含dNTPs、rATP、oligo-dT引物和內(nèi)部合成RNA對(duì)照（miRNA逆轉(zhuǎn)錄對(duì)照[miRTC]），可評(píng)估使用miScript miRNA PCR Arrays進(jìn)行譜分析實(shí)驗(yàn)的逆轉(zhuǎn)錄性能（獲取更多信息，請(qǐng)參考miScript miRNA PCR Array Handbook）。
miScript II RT Kit提供兩種緩沖液：miScript HiSpec Buffer和miScript HiFlex Buffer，滿足使用real-time PCR進(jìn)行miRNA定量研究的特別要求（參見miScript II RT Kit buffers）。miScript HiSpec Buffer配合miScript miRNA PCR Arrays和miScript Primer Assays進(jìn)行成熟miRNA譜分析和定量實(shí)驗(yàn)時(shí)，提供理想的結(jié)果。miScript HiFlex Buffer適合于低通量miRNA定量實(shí)驗(yàn)，從同一樣本進(jìn)行如miRNA、mRNA和前體miRNA等不同種類的RNA的定量實(shí)驗(yàn)除外。
miScript HiSpec Buffer進(jìn)行逆轉(zhuǎn)錄實(shí)驗(yàn)
使用miScript HiSpec Buffer進(jìn)行逆轉(zhuǎn)錄反應(yīng)，確保成熟miRNAs的選擇性轉(zhuǎn)化，miScript PCR Controls靶向轉(zhuǎn)至cDNA。使用oligo-dT引物，成熟miRNAs通過poly(A)聚合酶加尾后，被逆轉(zhuǎn)錄至cDNA（參見Selective conversion of mature miRNAs into cDNA in miScript HiSpec Buffer）。加尾和逆轉(zhuǎn)錄在同一試管內(nèi)同時(shí)進(jìn)行。oligo-dT引物有一個(gè)3'退化錨點(diǎn)和一個(gè)在5'端的通用標(biāo)簽序列，可在real-time PCR步驟擴(kuò)增成熟miRNA。miScript Primer Assays配合miScript SYBR Green PCR Kit，確保通過real-time PCR靈敏、特異性的定量miRNA。加尾和通用標(biāo)簽保證miScript Primer Assays不會(huì)檢測(cè)到基因組DNA。
miScript HiFle