miRNeasy FFPE Kit

從福爾馬林固定、石蠟包埋的組織切片中進行miRNA和總RNA的純化

有效純化miRNA和總RNA

創(chuàng)新方法用于克服福爾馬林造成的交聯(lián)

有效釋放RNA而不會破壞其完整性

85分鐘流暢的操作得到RNA

miRNeasy FFPE Kit確保從福爾馬林固定、石蠟包埋（FFPE）的組織切片中純化含約18個核苷酸以上的總RNA。試劑盒能夠回收可用的RNA片段，包括miRNA和其他小RNA，用于定量real-time RT-PCR等下游應用。

性能

使用miRNeasy FFPE Kit純化的總RNA和miRNA的產(chǎn)量和性能優(yōu)于采用其他方法純化的miRNA，如使用苯酚-氯仿抽提或者其他供應商的類似試劑盒（參見Effective real-time RT-PCR quantification、Efficient RNA purification from FFPE tissues和Superior yields and performance）。

原理

用福爾馬林固定的組織導致RNA-RNA和RNA-蛋白質(zhì)交聯(lián)，從而影響了RNA在下游應用中的表現(xiàn)。miRNeasy FFPE Kit提供了獨特的裂解和孵育條件，可逆轉(zhuǎn)福爾馬林對RNA造成的交聯(lián)。特別研制的的裂解緩沖液有效地將RNA從組織切片中釋放出來，同時避免了RNA的進一步降解。裂解產(chǎn)物用DNase消化，然后優(yōu)化的結(jié)合條件能夠純化含約18個以上核苷酸的所有可用的RNA。

操作流程

所有的miRNeasy FFPE操作流程都可在85分鐘之內(nèi)完成。優(yōu)化的裂解緩沖液能夠用蛋白質(zhì)酶K消化樣本裂解產(chǎn)物，僅需15分鐘而且不損耗RNA產(chǎn)量。裂解后，在80°C下孵育樣本15分鐘逆轉(zhuǎn)福爾馬林交聯(lián)。然后，在優(yōu)化的DNase消化步驟中，用DNase Booster Buffer快速去除基因組DNA，并且用RNeasy MinElute離心柱純化濃縮的RNA（參見miRNeasy FFPE procedure）。由于RNA的洗脫體積僅有14–30 μl，在下游應用中可實現(xiàn)較小的反應體積。

應用

miRNeasy FFPE Kit能夠純化包含miRNA的總RNA，并且適用于多種下游應用，如定量real-time RT-PCR。