Sephadex LH-20是由葡聚糖G-25羥丙基化加工而成，屬于分子篩凝膠，尤其適用于天然產(chǎn)物在有機(jī)溶劑中的純化。例如：類固醇、萜類、脂類以及小分子多肽等，Pharmadex LH-20同時(shí)適用于分子類別非常相似的物質(zhì)的分離和工業(yè)規(guī)模的制備，既可用于初步純化步驟，也可用于最終精制步驟，如非對(duì)映同分異構(gòu)體的分離。
制備凝膠懸浮液
Sephadex LH-20在使用之前必須進(jìn)行溶脹。在溶脹的過程中，要盡量避免過分?jǐn)嚢，否則會(huì)破壞球形膠粒，且要避免使用磁力攪拌器。
1． 在室溫下，將凝膠溶脹于層析溶劑中至少三小時(shí)，溶脹后膠體積的大小決定于所使用的溶劑系統(tǒng)，請(qǐng)參考后頁(yè)之干膠溶脹表計(jì)算特定柱體積所需要干膠的量。
2． 使溶脹膠體積沉淀之后占總體積的75%，上層溶劑占25%，這時(shí)，懸浮液從一個(gè)容器倒入另一容器時(shí)膠？梢苿(dòng)。
3． 將溶脹后的凝膠根據(jù)裝柱要求均勻倒入柱內(nèi)，在保證膠粒不變形的前提下，應(yīng)在盡可能高的壓力下裝柱，反壓不要超過1.5ba。
平衡
上樣前，用洗脫液平衡層析柱至少兩個(gè)柱體積直到基線變得平穩(wěn)為止，如改變?nèi)軇⿷?yīng)該注意凝膠在新溶劑中的溶脹性質(zhì)，并根據(jù)性質(zhì)確定柱高調(diào)節(jié)器的位置，如使用相同的溶劑，在以后的層析中柱平衡可以省略。
洗脫液
為確保延長(zhǎng)層析柱的使用壽命，所有的緩沖液都應(yīng)該離心或經(jīng)過0.45um的膜過濾以除去雜質(zhì)。
樣品
樣品體積應(yīng)該占柱總體積的1-2%，同樣在使用之前樣品應(yīng)該離心或經(jīng)過0.45um的膜過濾。
洗脫
洗脫流速應(yīng)根據(jù)情況而定，最大張性流速約12cm/min（反壓1.5ba），建議流速為1-10cm/h。總體來(lái)說，較低的流速，具有較高的分辯率。
再生
凝膠再生通常是先用2-3個(gè)柱體積的洗脫液進(jìn)行清洗，如更換洗脫液，則需要重新平衡。
體積流速與線性流速的關(guān)系
線性流速=體積流速/橫截面積
溶脹體積
由于Pharmadex LH-20的溶脹體積依賴于溶劑，所以對(duì)于不同直徑的柱可根據(jù)比例增加或減少舊柱體積以便計(jì)算出新體積。
新體積=舊體積×（新柱體積/舊柱體積）
膠的性質(zhì)
Sephadex LH-20同時(shí)具備親水和親脂雙重性質(zhì)，且被分離物質(zhì)的極性在分離過程中起著重要作用。
排阻極限 4-5KD（與所用溶劑有關(guān)）
上樣量
吸附模式 取決于所需分辯率
分子量大小 小于總體積的20%
正相分配 小于總體積的1%
膠粒形狀 球形，多孔
顆粒大。ǜ桑 18-111um（直徑）
顆粒大小中間值（干） 70um（直