Trizol Reagent
簡介:TRIzol是一種新型總RNA抽提試劑，可以直接從細胞或組織中提取總RNA。其含有苯酚、異硫氰酸胍等物質，能迅速破碎細胞并抑制細胞釋放出的核酸酶。
TRIzol在破碎和溶解細胞時能保持RNA的完整性，因此對純化DNA及標準化RNA的生產十分有用。
TRIzol的成分:
TRIzol的主要成分是苯酚。苯酚的主要作用是裂解細胞，使細胞中的蛋白，核酸物質解聚得到釋放。苯酚雖可有效地變性蛋白質，但不能完全抑制RNA酶活性，因此TRIzol中還加入了8－羥基喹啉、異硫氰酸胍、β-巰基乙醇等來抑制內源和外源RNase(RNA酶)。
※0.1%的8－羥基喹啉可以抑制RNase，與氯仿聯合使用可增強抑制作用。
※異硫氰酸胍屬于解偶劑，是一類強力的蛋白質變性劑，可溶解蛋白質并使蛋白質二級結構消失，導致細胞結構降解，核蛋白迅速與核酸分離。
※β-巰基乙醇的主要作用是破壞RNase蛋白質中的二硫鍵。
TRIzol的使用方法:
用勻漿器將組織磨碎，加入TRIzol處理組織。5分鐘后加入氯仿，以每分鐘12000轉離心5分鐘，樣品即分成水樣層、中間層和有機層。
※RNA存在于水樣層中，收集水樣層后可以通過異丙醇沉淀RNA來還原。
※在除去水樣層后，有機層中的DNA和蛋白質也能相繼以沉淀的方式還原：乙醇能使中間層的DNA沉淀析出，在有機層中加入異丙醇能沉淀出蛋白質。
每100ml TRIzol可以抽提100個六孔板中的樣品或100個50-80mg的組織樣品。無論樣品是人、動物、植物還是細菌組織，該方法對少量的組織(50-100mg)和細胞(約五百萬個)及大量的組織(≥1g)和細胞(超過一千萬個)均有較好的分離效果。
每一百萬細胞用TRIzol抽提可得5-15微克RNA，每毫克組織用TRIzol抽提可得1-10微克RNA(產量因細胞和組織不同而異)。
TRIzol操作上的簡便性允許其同時處理多個樣品，所有的操作可以在一小時內完成。
TRIzol抽提的總RNA能夠避免DNA和蛋白質的污染，故而能夠作RNA 印跡分析、斑點雜交、poly(A)+ 選擇、體外翻譯、RNA酶保護分析和單分子克隆(PCR)。
※如果是用于PCR，當兩條引物位于單一外顯子內時，建議用級聯擴大的DNase I(Cat. No. 18068)來處理抽提的總RNA。
※TRIzol試劑能促進不同種屬、不同分子量大小的多種RNA的析出。例如，從大鼠肝臟抽提的RNA經過瓊脂糖凝膠電泳并用溴化乙啶染色，可見許多介于7kb和15kb之間的不連續(xù)的高分子量條帶(mRNA和hnRNA成分)，兩條優(yōu)勢核糖體RNA條帶位于~5 kb (28S)和~2 kb (18S)，低分子量RNA介于0.1和0.3kb之間 (tRNA, 5S)。當抽提的RNA用TE稀釋時，其A260/A280比值≥1.8。抽提小RNA時宜-70℃沉淀過夜。
TRIzol對人體有害，使用時應戴