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實(shí)驗(yàn)室常用貯存液的配制

發(fā)布人:浩然生物 瀏覽 9052次【字號(hào) 】 發(fā)布時(shí)間:2011年06月03日 打印本頁(yè)

1、40%丙烯酰胺
【配制方法】
    把380g丙烯酰胺(DNA測(cè)序級(jí))和20g N,N’-亞甲雙丙烯酰胺溶于總體積為600ml的蒸餾水中。繼續(xù)按上述配制30%丙烯酰胺溶液的方法處理,但加熱溶解后應(yīng)以蒸餾水補(bǔ)足至終體積為1L。
【注意】
    見上述配制30%丙烯酰胺的說(shuō)明,40%丙烯酰胺溶液用于DNA序列測(cè)定。
2、30%丙烯酰胺溶液
【配制方法】
    將29g丙烯酰胺和1g N,N’-亞甲雙丙烯酰胺溶于總體積為60ml的水中。加熱至37℃溶解之,補(bǔ)加水至終體積為100ml。用Nalgene濾器(0.45μm孔徑)過(guò)濾除菌,查證該溶液的pH值應(yīng)不大于7.0,置棕色瓶中保存于室溫。
【注意】
    丙烯酰胺具有很強(qiáng)的神經(jīng)毒性并可以通過(guò)皮膚吸收,其作用具累積性。稱量丙烯酰胺和亞甲雙丙烯酰胺時(shí)應(yīng)戴手套和面具?烧J(rèn)為聚丙烯酰胺無(wú)毒,但也應(yīng)謹(jǐn)慎操作,因?yàn)樗可能會(huì)含有少量未聚合材料。一些價(jià)格較低的丙烯酰胺和雙丙烯酰胺通常含有一些金屬離子,在丙烯酰胺貯存液中加入大約0.2體積的單床混合樹脂(MB-1Mallinckrodt),攪拌過(guò)夜,然后用Whatman 1號(hào)濾紙過(guò)濾以純化之。在貯存期間,丙烯酰胺和雙丙烯酰胺會(huì)緩慢轉(zhuǎn)化成丙烯酰和雙丙烯酸。
3、放線菌素D溶液
【配制方法】
    把20mg放線菌素D溶解于4ml 100%乙醇中,1:10稀釋貯存液,用100%乙醇作空白對(duì)照讀取OD440值。放線菌素D(分子量為1255)純品在水溶液中的摩爾消化系數(shù)為21,900,故而1mg/ml的放線菌素D溶液在440nm處的吸光值為0.182,放線菌素D的貯存液應(yīng)放在包有箔片的試管中,保存于-20℃。
【注意】
    放線菌素D是致畸劑和致癌劑,配制該溶液時(shí)必須戴手套并在通風(fēng)櫥內(nèi)操作,而不能在開放在實(shí)驗(yàn)桌面上進(jìn)行,謹(jǐn)防吸入藥粉或讓其接觸到眼睛或皮膚。
    藥廠提供的作治療用途的放線菌素D制品常含有糖或鹽等添加劑。只要通過(guò)測(cè)量貯存液在440nm波長(zhǎng)處的光吸收確定放線菌素D的濃度,這類制品便可用于抑制自身引導(dǎo)作用。
4、0.1mol/L腺苷三磷酸(ATP)溶液
【配制方法】
    在0.8ml水中溶解60mg ATP,用0.1mol/L NaOH調(diào)至pH值至7.0,用蒸餾水定容1ml,分裝成小份保存于-70℃
5、10mol/L乙酸酰溶液
【配制方法】
    把770g乙酸酰溶解于800ml水中,加水定容至1L后過(guò)濾除菌。
6、10%過(guò)硫酸銨溶液
【配制方法】
    把1g過(guò)硫酸銨溶解于終量為10ml的水溶液中,該溶液可在4℃保存數(shù)周。
7、BCIP溶液
【配制方法】
    把0.5g的5-溴-4-氯-3-吲哚磷酸二鈉鹽(BCIP)溶解于10ml 100%的二甲基甲酰胺中,保存于4℃


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