賽默飛世爾公司旗下的Pierce推出了Western Blot的信號(hào)增強(qiáng)劑——SuperSignal Western Blot Enhancer。此增強(qiáng)劑包含兩種試劑：抗原預(yù)處理液和一抗稀釋液，能將信號(hào)強(qiáng)度和靈敏度提高3-10倍，從而顯著降低背景，并增強(qiáng)低豐度和弱免疫反應(yīng)性抗原的檢測(cè)。
       眾所周知，Western blotting是鑒定蛋白的經(jīng)典方法，但此過程中存在很多變數(shù)。抗原豐度、抗體的特異性和反應(yīng)性等因素都會(huì)對(duì)結(jié)果產(chǎn)生相當(dāng)大的影響。若是高豐度蛋白，那自然好辦。若不幸研究的是低豐度蛋白，最后膜上出現(xiàn)了若有若無的一條帶，那可真是糾結(jié)啊。說沒有，似乎也有一條帶；說有，似乎又像是背景。
為了解決你這種煩惱，賽默飛世爾公司旗下的Pierce推出了Western Blot的信號(hào)增強(qiáng)劑——SuperSignal Western Blot Enhancer。此增強(qiáng)劑包含兩種試劑：抗原預(yù)處理液和一抗稀釋液，能將信號(hào)強(qiáng)度和靈敏度提高3-10倍，從而顯著降低背景，并增強(qiáng)低豐度和弱免疫反應(yīng)性抗原的檢測(cè)。
SuperSignal增強(qiáng)劑使用起來也很簡(jiǎn)單。在轉(zhuǎn)印之后，封閉之前，用足量的抗原預(yù)處理液浸泡膜10分鐘。一抗雜交前用一抗稀釋液稀釋一抗。其他操作均按照Western blotting的標(biāo)準(zhǔn)操作流程進(jìn)行。此增強(qiáng)劑可用于PVDF膜或硝酸纖維素膜，并與熒光、比色法和化學(xué)發(fā)光檢測(cè)兼容。
SuperSignal Western Blot增強(qiáng)劑的特點(diǎn)如下：
•提高靈敏度——實(shí)現(xiàn)信號(hào)強(qiáng)度和靈敏度的3-10倍提高
•改善特異性——改善質(zhì)量差或低親和力抗體的信噪比
•更清晰——降低背景，帶來更干凈的Western blot
•兼容性好——適合PVDF膜或硝酸纖維素膜，與熒光、比色法和化學(xué)發(fā)光檢測(cè)兼容
細(xì)胞裂解液經(jīng)過電泳分離后，轉(zhuǎn)印到硝酸纖維素膜上，并利用常規(guī)方法（左）或SuperSignal Western Blot增強(qiáng)劑步驟（右）開展Western blotting。在上圖中，帶有PC-3裂解液的膜用含5%牛奶的TBST溶液封閉，并與小鼠抗CDK5（1µg/mL）和HRP結(jié)合的山羊抗小鼠IgG（0.1µg/mL）雜交。利用Pierce ECL底物檢測(cè)（曝光1分鐘）。在下圖中，帶有HeLa裂解液的膜用含有Thermo Scientific Blocker BLOTTO的TBS封閉，并與兔抗GSK3a（1µg/mL）和HRP結(jié)合的山羊抗兔IgG（0.1µg/mL）雜交。利用SuperSignal West Pico 化學(xué)發(fā)光底物檢測(cè)（曝光10分鐘）。
若你在Western blot中也常遇到低信號(hào)、高背景的情況，那不妨試試SuperSignal增強(qiáng)劑。