Alamar-Blue 檢測(cè)試劑為細(xì)胞增殖和細(xì)胞毒性檢測(cè)提供了一種簡(jiǎn)便、快速、可靠、安全的方法，適用于高通量檢測(cè)實(shí)驗(yàn)。此試劑的主要成分是一種氧化還原指示劑其在氧化狀態(tài)下呈現(xiàn)紫藍(lán)色無(wú)熒光性，而在還原狀態(tài)下，轉(zhuǎn)變?yōu)槌史奂t或紅色熒光的還原產(chǎn)物，其吸收峰為530－560nm，而散射峰為590nm。
在細(xì)胞增殖過(guò)程中，細(xì)胞內(nèi)NADPH/NADP、 FADH/FAD、 FMNH/FMN和NADH/NAD的比值升高，處于還原環(huán)境。攝入細(xì)胞內(nèi)的染料被這些代謝中間體及細(xì)胞色素類還原后釋放到細(xì)胞外并溶于培養(yǎng)基中，使培養(yǎng)基從無(wú)熒光的靛青藍(lán)變成有熒光的粉紅色。最后用普通分光光度計(jì)或熒光光度計(jì)進(jìn)行檢測(cè)，吸光度和熒光強(qiáng)度與活性細(xì)胞數(shù)成正比。
與臺(tái)盼蘭、TTC、MTT、MTS等分析法相比，Alamar-Blue具有更多的優(yōu)勢(shì)。Alamar-Blue采用單一試劑，可以連續(xù)、快速地檢測(cè)細(xì)胞的增殖狀況。由于Alamar-Blue對(duì)細(xì)胞無(wú)毒、無(wú)害，不影響細(xì)胞代謝、細(xì)胞因子分泌、抗體合成等，可以對(duì)同一批細(xì)胞的增生狀態(tài)進(jìn)行連續(xù)觀察和進(jìn)一步的實(shí)驗(yàn)觀察。其適用于細(xì)菌、酵母類、昆蟲(chóng)類、魚(yú)類、哺乳類等多種細(xì)胞，以及貼壁細(xì)胞與非貼壁細(xì)胞的檢測(cè)，可以廣泛用于細(xì)胞增殖、細(xì)胞毒性以及病原微生物的快速檢測(cè)與鑒定。
非貼壁細(xì)胞和貼壁細(xì)胞都適用。所有操作在無(wú)菌條件下進(jìn)行。避免污染細(xì)胞，因?yàn)槲⑸镂廴疽矔?huì)還原alamarBlueTM，培養(yǎng)基中應(yīng)添加抗生素如青霉素G（1U/ml）、兩性霉素B（amphotericin B，0.0025ug/ml）。
氧化還原指示劑是pH敏感的，推薦使用磷酸緩沖液。10％胎牛血清對(duì)比色法檢測(cè)無(wú)影響，但是會(huì)淬滅部分熒光；因此，用熒光法檢測(cè)時(shí)對(duì)照溶液中需添加10％BSA。酚紅對(duì)檢測(cè)也有一定影響，結(jié)果會(huì)上調(diào)0.03%。一般來(lái)說(shuō)，應(yīng)使用非還原性的培養(yǎng)基，如RPMI1640、Hank’s－Eagle或 Dulbecco’s－Eagle。
在特殊系統(tǒng)中使用時(shí)，細(xì)胞密度、孵育時(shí)間、培養(yǎng)基成分及使用濃度等條件需要先優(yōu)化。
收集需檢測(cè)的細(xì)胞，以優(yōu)化的密度鋪于加入10％（v/v）alamarBlueTM的新鮮培養(yǎng)基上，
1.細(xì)胞培養(yǎng)：RPMI培養(yǎng)基，添加HEPES、10％胎牛血清、1％谷氨酸鹽、適當(dāng)?shù)目股兀?br />2.細(xì)胞覆蓋率達(dá)80％時(shí)，用胰酶消化鋪于微孔板中，密度在每孔825~80000個(gè)細(xì)胞。
3.1個(gè)小時(shí)后，加入alamarBlueTM，37℃ 5％CO2培養(yǎng)
4. 到預(yù)定的時(shí)間點(diǎn)后檢測(cè)alamarBlueTM的還原情況
注意：若檢測(cè)的還原度不夠，可選擇繼續(xù)培養(yǎng)再檢測(cè)，這是該方法的一大優(yōu)越之處
研究特殊藥物對(duì)細(xì)胞周期的影響（如roscovitine，一種抗癌藥、周期蛋白激酶抑制劑），胰酶消化細(xì)胞、收集并鋪于含藥物的培養(yǎng)基上，37℃ 5％CO2培養(yǎng)2天；除去之前的培養(yǎng)基換上含10％（v/v）alamarBlueTM的新培養(yǎng)基，在預(yù)定的時(shí)間點(diǎn)檢測(cè)其還原度.