產(chǎn)品英文名稱(chēng)：Pichia pastoris HCP ELISA kit
產(chǎn)品中文名稱(chēng)：畢赤酵母宿主細(xì)胞蛋白免疫檢測(cè)試劑盒
Pichia pastoris HCP ELISA kit 產(chǎn)品介紹：
Pichia pastoris畢赤酵母基因表達(dá)系統(tǒng)經(jīng)過(guò)十多年發(fā)展，成為較完善的外源基因酵母表達(dá)系統(tǒng)，具有易于高密度酵母發(fā)酵，欲表達(dá)基因可以穩(wěn)定整合在宿主酵母基 因組中，能使產(chǎn)物有效分泌并適當(dāng)糖基化，培養(yǎng)方便經(jīng)濟(jì)等特點(diǎn)。Pichia pastoris畢赤酵母基因表達(dá)系統(tǒng)利用強(qiáng)效可調(diào)控啟動(dòng)子AOX1，已高效表達(dá)了HBsAg、TNF、EGF、破傷風(fēng)毒素C片段、基因工程抗體等多種外 源基因，證實(shí)Pichia pastoris畢赤酵母表達(dá)系統(tǒng)為高效、實(shí)用、簡(jiǎn)便 ，以提高表達(dá)量并保持產(chǎn)物生物學(xué)活性為突出特征的外源基因表達(dá)系統(tǒng)，而且非常適宜擴(kuò)大為工業(yè)規(guī)模Pichia pastoris畢赤酵母發(fā)酵。
Pichia pastoris HCP ELISA試劑盒用于檢測(cè)在畢赤酵母表達(dá)系統(tǒng)中重組表達(dá)的產(chǎn)物宿主細(xì)胞蛋白污染。最低檢測(cè)濃度<0.3ng/mL。
檢測(cè)原理：Pichia pastoris HCPs檢測(cè)是一個(gè)雙位點(diǎn)酶聯(lián)免疫檢測(cè)。樣本中包含的Pichia pastoris HCPs蛋白與標(biāo)記有抗- Pichia pastoris抗體的辣根過(guò)氧化物酶同時(shí)反應(yīng)，反應(yīng)發(fā)生在之前涂有一層吸附性抗- Pichia pastoris蛋白抗體的微量滴定板中進(jìn)行。免疫反構(gòu)成為夾層式結(jié)構(gòu)：固相抗休-HCP-酶標(biāo)記抗體。反應(yīng)結(jié)束后清洗微量滴定板去除未結(jié)合反應(yīng)物。添加 TMB作用底物反應(yīng)。微量滴定板讀數(shù)器上測(cè)定水解物濃度，水解物濃度與Pichia pastoris HCPs蛋白濃度成比例。用提供的標(biāo)準(zhǔn)液繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)，根據(jù)讀數(shù)可以計(jì)算出Pichia pastoris HCPs蛋白含量。
檢測(cè)過(guò)程：標(biāo)準(zhǔn)檢測(cè)：取出所有試劑平衡到室溫→分別移取25µl標(biāo)準(zhǔn)液，對(duì)照物和樣品至待測(cè)孔→移取100µl anti- Pichia pastoris:HRP(#F141)至每孔→密封滴定板，搖床室溫溫育3小時(shí)（快速檢測(cè)時(shí)溫育1小時(shí)），180rpm→清空小孔，用紙吸干殘留液，350µl清洗緩沖液清洗4次→加100µl TMB 作用物(#F005)→室溫靜置30分鐘，不需搖床→加100µl反應(yīng)終止液(#F006)→分光光度計(jì)450/650nm讀數(shù)
結(jié)果分析：標(biāo)準(zhǔn)液(0, 1, 4, 20, 75, 250ng/mL)可用于制作標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)，標(biāo)準(zhǔn)液濃度相當(dāng)于免疫反應(yīng)HCP總濃度。根據(jù)測(cè)定的小孔中標(biāo)準(zhǔn)液吸光值繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)。數(shù)據(jù)分析可以使用計(jì)算機(jī)選配曲線(xiàn)，例如點(diǎn)到點(diǎn)，三次樣本函數(shù)，或四參數(shù)邏輯曲線(xiàn)。不要使用線(xiàn)性回歸分析修改樣品吸光值，這樣會(huì)出現(xiàn)顯著誤差。也可以手工繪圖，Y軸標(biāo)注吸光值，X軸標(biāo)注濃度。然后根據(jù)樣品吸光值計(jì)算出樣品中HCP濃度。（操作時(shí)每一濃度標(biāo)準(zhǔn)液都要重復(fù)滴定到兩個(gè)小孔中，以便計(jì)算平均分光光度值，樣品也需計(jì)算平均吸光值）。
Pichia pastoris HCP ELISA kit產(chǎn)品組份：
● Anti- Pichia pastoris:HRP(辣根過(guò)氧化物酶標(biāo)記)　         1x12mL   F141(Product#)
● Anti- Pichia pastoris coated微量滴定板　                      12x8孔　  F142
● Pichia pastoris HCP標(biāo)準(zhǔn)液(0, 1, 4, 20, 75, 250ng/mL)   1mL/瓶　 F143
● Stop Solution終止液(0.5M硫磺酸)  　　　                     1x12mL　 F006
● TMB (3,3’,5,5’-四甲基聯(lián)苯氨)　                                     1x12mL　 F005
● Wash Concentrate清洗物(20倍濃縮)　                           1x50mL   F004

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