產(chǎn)品編號：218161
產(chǎn)品名稱：miScript II RT Kit (50) 
供應商：Qiagen
目錄價：5390
miScript II RT Kit
使用miScript PCR System，對包含miRNA的總RNA進行逆轉(zhuǎn)錄
靈敏和特異性的檢測miRNA
利用單一cDNA定量檢測多種miRNA
利用同一cDNA定量檢測miRNA和mRNA
利用同一cDNA定量檢測成熟miRNA和miRNA前體
專有技術(shù)合成RNA，評估逆轉(zhuǎn)錄效率
miScript II RT Kit是miScript PCR System的重要組成部分，用于miRNA定量檢測。配合miScript SYBR Green PCR Kit和miScript PCRarrays（miRNome或Pathway-Focused miScript miRNA PCR Arrays）或所需的檢測（用于miRNA或其他非編碼RNA的miScript Primer Assays、用于miRNA前體的miScript Precursor Assays或用于mRNA的QuantiTect Primer Assays），miScript II RT Kit合成的cDNA可作為real-time PCR 的模板。
性能
miScript II RT Kit配合miScript PCR System的其他組分，靈敏和特異性地檢測并定量miRNA。由于許多miRNA表達水平低，靈敏度特別重要，以確保數(shù)據(jù)的可靠。miScript PCR System靈敏度高、動態(tài)范圍廣和持續(xù)高擴增率。其卓越的性能使得初次嘗試時即可獲得高度重復性結(jié)果（參見Reproducible results in technical and biological replicates）。
高特異性
miRNAs存在許多miRNA亞型家族，有些只是單個堿基的不同。這使得miRNA定量面臨很大挑戰(zhàn)。miScript PCR System可有效識別緊密相關(guān)的miRNA亞型，即使是只有單個堿基不同的miRNA也可（見表）。
miScript PCR System的特異性
原理
miScript PCR System應用SYBR Green-based real-time PCR，能夠靈敏和特異性地進行miRNA的定量和譜分析。miScript PCR System可以完成從RNA中合成cDNA及后續(xù)的real-time PCR檢測miRNAs涉及的所有步驟。
miScript PCR System包含以下組分：
miScript II RT Kit，可簡單、單步合成cDNA。單個cDNA合成反應可用于檢測數(shù)以百計的miRNAs。雙緩沖體系滿足使用real-time PCR進行miRNA定量的獨特要求。
miScript SYBR Green PCR Kit，包含QuantiTect SYBR Green PCR Master Mix和反向引物miScript Universal Primer，配合miScript Primer Assay或miScript miRNA PCR Array進行miRNAs檢測。
miScript Primer Assay或miScript Precursor Assay，前者為miRNA特異性正向引物，用于檢測成熟miRNAs。后者包含正向和反向引物，靶向作用于miRNA前體的頸環(huán)序列。該產(chǎn)品使用miRBase中的最新序列信息設計。
miScript miRNA PCR Array，miRNome或Pathway-Focused miScript miRNA PCR Arrays被預先設定，單次使用的PCR孔板/孔盤可快速分析成熟miRNAs。
miScript miRNA PCR Array data analysis tool，免費的基于網(wǎng)絡的工具，簡化了用于miScript miRNA PCR Arrays相對定量的ΔΔCT方法。
miScript II RT Kit雙緩沖體系
miScript II RT Kit包含miScript Reverse Transcriptase Mix、10x miScript Nucleics Mix、5x miScript HiSpec Buffer和5x miScript HiFlex Buffer。miScript Reverse Transcriptase Mix是一種經(jīng)優(yōu)化的poly(A)聚合酶和逆轉(zhuǎn)錄酶混合物。miScript Nucleics Mix包含dNTPs、rATP、oligo-dT引物和內(nèi)部合成RNA對照（miRNA逆轉(zhuǎn)錄對照[miRTC]），可評估使用miScript miRNA PCR Arrays進行譜分析實驗的逆轉(zhuǎn)錄性能（獲取更多信息，請參考miScript miRNA PCR Array Handbook）。
miScript II RT Kit提供兩種緩沖液：miScript HiSpec Buffer和miScript HiFlex Buffer，滿足使用real-time PCR進行miRNA定量研究的特別要求（參見miScript II RT Kit buffers）。miScript HiSpec Buffer配合miScript miRNA PCR Arrays和miScript Primer Assays進行成熟miRNA譜分析和定量實驗時，提供理想的結(jié)果。miScript HiFlex Buffer適合于低通量miRNA定量實驗，從同一樣本進行如miRNA、mRNA和前體miRNA等不同種類的RNA的定量實驗除外。
miScript HiSpec Buffer進行逆轉(zhuǎn)錄實驗
使用miScript HiSpec Buffer進行逆轉(zhuǎn)錄反應，確保成熟miRNAs的選擇性轉(zhuǎn)化，miScript PCR Controls靶向轉(zhuǎn)至cDNA。使用oligo-dT引物，成熟miRNAs通過poly(A)聚合酶加尾后，被逆轉(zhuǎn)錄至cDNA（參見Selective conversion of mature miRNAs into cDNA in miScript HiSpec Buffer）。加尾和逆轉(zhuǎn)錄在同一試管內(nèi)同時進行。oligo-dT引物有一個3'退化錨點和一個在5'端的通用標簽序列，可在real-time PCR步驟擴增成熟miRNA。miScript Primer Assays配合miScript SYBR Green PCR Kit，確保通過real-time PCR靈敏、特異性的定量miRNA。加尾和通用標簽保證miScript Primer Assays不會檢測到基因組DNA。
miScript HiFlex Buffer進行逆轉(zhuǎn)