名稱：pENTR™/D-TOPO® Cloning Kit with One Shot® TOP10 Chemically Competent E. coli
貨號：K240020
規(guī)格：20reactions
價格：4540
Invitrogen 的pENTR™⁄D-TOPO® 克隆試劑盒采用高效的5分鐘克隆策略("TOPO® Cloning") ，能夠?qū)⑵蕉薖CR產(chǎn)物能以定向插入Gateway® 系統(tǒng)或多位點Gateway® 系統(tǒng)，平端PCR克隆產(chǎn)物的定向插入率超過90%，無需連接酶，PCR后處理或者限制性酶。這一試劑盒包括了篩選PCR目標擴增基因所需的一切試劑
簡便地插入Gateway® 系統(tǒng)
插入Gateway®系統(tǒng)，只需擴增您的目標基因，之后將PCR產(chǎn)物直接加入到試劑盒中提供的具有拓撲異構(gòu)酶活性的pENTR™⁄D-TOPO®載體中，孵育5分鐘，然后轉(zhuǎn)化試劑盒中提供的感受態(tài) 大腸桿菌 細胞。得到的含有Gateway®的插入克隆就可以高效地與Gateway®目標載體進行重組。
pENTR™⁄D-TOPO®載體(圖1)包括M13和T7引物測序位點，以及PCR產(chǎn)物插入位點側(cè)翼的attL重組位點。這使得克隆的測序驗證以及與您選擇的含attR Gateway®目標載體進行重組變得簡單�？敲顾乜剐曰蛞约皃UC啟動子可用于篩選和在大腸桿菌中進行高拷貝擴增。
使用TOPO®定向克隆技術(shù)，您不再需要PCR純化，載體制備，或者其他耗時的DNA操作步驟。只需要直接將您的PCR反應(yīng)產(chǎn)物加入到提供的含拓撲異構(gòu)酶的載體中，孵育5分鐘，然后進行轉(zhuǎn)化，就可獲得90%以上正確插入的克隆。載體中的4個堿基，與您在PCR反應(yīng)中使用的正向引物中預(yù)先設(shè)計的4個堿基進行配對，保證了拓撲異構(gòu)酶催化的連接反應(yīng)的定向性(圖2)。
Gateway®重組克隆技術(shù)克服了限制性酶催化克隆的局限性，使您能在短短1個小時內(nèi)將產(chǎn)物插入任何表達系統(tǒng)中，效率高達99%，而且Gateway® 重組反應(yīng)是可逆的。這使得能在不同載體中轉(zhuǎn)移同一序列的DNA，無需使用限制性酶，連接酶，亞克隆步驟，篩選大量克隆，或者重新測序，幫助您節(jié)約時間和金錢，降低工作量。
當其應(yīng)用于克隆時，TOPO®技術(shù)和Gateway®重組克隆技術(shù)就成為大多數(shù)科研人員的可靠助手