名稱：pENTR™/SD/D-TOPO® Cloning Kit with One Shot® TOP10 Chemically Competent E. coli
貨號(hào)：K242020
規(guī)格：20 reactions
價(jià)格：4540
插入Gateway®系統(tǒng)，只需擴(kuò)增您的目標(biāo)基因，之后將PCR產(chǎn)物直接加入到試劑盒中提供的具有拓?fù)洚悩?gòu)酶活性的pENTR™⁄D-TOPO®載體中，孵育5分鐘，然后轉(zhuǎn)化試劑盒中提供的感受態(tài) 大腸桿菌 細(xì)胞。得到的含有Gateway®的插入克隆就可以高效地與Gateway®目標(biāo)載體進(jìn)行重組。
pENTR™⁄D-TOPO®載體(圖1)包括M13和T7引物測(cè)序位點(diǎn)，以及PCR產(chǎn)物插入位點(diǎn)側(cè)翼的attL重組位點(diǎn)。這使得克隆的測(cè)序驗(yàn)證以及與您選擇的含attR Gateway®目標(biāo)載體進(jìn)行重組變得簡(jiǎn)單�？敲顾乜剐曰蛞约皃UC啟動(dòng)子可用于篩選和在大腸桿菌中進(jìn)行高拷貝擴(kuò)增。
使用TOPO®定向克隆技術(shù)，您不再需要PCR純化，載體制備，或者其他耗時(shí)的DNA操作步驟。只需要直接將您的PCR反應(yīng)產(chǎn)物加入到提供的含拓?fù)洚悩?gòu)酶的載體中，孵育5分鐘，然后進(jìn)行轉(zhuǎn)化，就可獲得90%以上正確插入的克隆。載體中的4個(gè)堿基，與您在PCR反應(yīng)中使用的正向引物中預(yù)先設(shè)計(jì)的4個(gè)堿基進(jìn)行配對(duì)，保證了拓?fù)洚悩?gòu)酶催化的連接反應(yīng)的定向性(圖2)。
Gateway®重組克隆技術(shù)克服了限制性酶催化克隆的局限性，使您能在短短1個(gè)小時(shí)內(nèi)將產(chǎn)物插入任何表達(dá)系統(tǒng)中，效率高達(dá)99%，而且Gateway® 重組反應(yīng)。Invitrogen 的pENTR™⁄SD⁄D-TOPO®克隆試劑盒采用高效的5分鐘克隆策略("TOPO®克隆") ，能夠?qū)⑵蕉薖CR產(chǎn)物能以定向插入Gateway® 系統(tǒng)或者多位點(diǎn)Gateway® 系統(tǒng)，平端PCR克隆產(chǎn)物的定向插入pENTR™⁄SD⁄D-TOPO® 載體的效率超過(guò)90%，而且包含Shine-Dalgarno上游序列，用于原核系統(tǒng)中的表達(dá)。這一試劑盒包括了篩選PCR目標(biāo)擴(kuò)增基因所需的一切試劑。