QIAGEN OneStep RT-PCR Kit專為進(jìn)行便利、高靈敏度的一步式RT-PCR設(shè)計(jì)。其獨(dú)特的酶和特別設(shè)計(jì)的緩沖液確保了逆轉(zhuǎn)錄和PCR反應(yīng)高效、準(zhǔn)確的進(jìn)行，無需進(jìn)行優(yōu)化。
QIAGEN OneStep RT-PCR Enzyme Mix含有為逆轉(zhuǎn)錄和PCR反應(yīng)特別設(shè)計(jì)的酶。Omniscript和Sensiscrip逆轉(zhuǎn)錄酶對(duì)RNA模板有高度親和性，確保了RNA逆轉(zhuǎn)錄的靈敏度達(dá)到1 pg到2 µg。逆轉(zhuǎn)錄完成后，升溫至95°C，保持15分鐘，活化HotStarTaq DNA Polymerase，同時(shí)使逆轉(zhuǎn)錄酶失活。這種方法可減少引物二聚體等非特異性擴(kuò)增產(chǎn)物的生成，并減小背景影響，確保RT-PCR的高度靈敏性和可重復(fù)性（參見"使用少量模板進(jìn)行高特異性RT-PCR"和"高效檢測(cè)病毒RNA"）。
退火溫度范圍大
引物的最佳退火溫度取決于堿基對(duì)的組成（如：A、T、G、C核苷酸的比例）、引物的濃度和反應(yīng)的離子環(huán)境。QIAGEN PCR Buffers含有K+和NH4+。使用該緩沖液可在很大的溫度范圍內(nèi)增加特異性PCR產(chǎn)物的產(chǎn)量（參見"QIAGEN PCR Buffers中的鉀離子和銨離子促進(jìn)特異性產(chǎn)物的生成"）。其原理是破壞非特異性結(jié)合的引物對(duì)，使反應(yīng)更加活躍，減少繁瑣的溫度優(yōu)化過程。相反，如使用僅含 K+的PCR或一步式RT-PCR緩沖液，PCR最佳退火溫度的范圍較小，可靠性較差；參見"一步式RT-PCR退火溫度的影響"。
QIAGEN OneStep RT-PCR Buffer專為提高逆轉(zhuǎn)錄和PCR擴(kuò)增的效率而設(shè)計(jì)。該緩沖液含有新型添加物，可防止逆轉(zhuǎn)錄酶對(duì)PCR擴(kuò)增的抑制（這是一步式RT-PCR的常見問題）。該緩沖液確保了在較大溫度范圍和Mg2+濃度范圍內(nèi)，引物與模板特異性結(jié)合，可對(duì)所有RNA模板進(jìn)行高效的 RT-PCR擴(kuò)增。QIAGEN OneStep RT-PCR Kit含有Q-Solution，這是可修飾核酸的解鏈行為的新型添加物。Q-Solution可促進(jìn)高GC含量或含較多二級(jí)結(jié)構(gòu)的模板的逆轉(zhuǎn)錄和擴(kuò)增（參見"使用Q-Solution對(duì)高GC含量的模板進(jìn)行RT-PCR"）。使用Q-Solution可簡(jiǎn)化復(fù)雜模板RT-PCR的優(yōu)化過程。QIAGEN OneStep RT-PCR Kit含有您所需的所有試劑，可進(jìn)行快速、簡(jiǎn)便的高靈敏度RT-PCR。