【實(shí)驗(yàn)原理】： Western Blot 印跡方法，又稱為免疫印記，是將獲得的蛋白質(zhì)樣品通

過SDS-聚丙烯酰胺凝膠電泳，對(duì)不同分子量的蛋白質(zhì)進(jìn)行分離，并通過轉(zhuǎn)移電泳將凝膠上分離到的蛋白質(zhì)轉(zhuǎn)印至固相支持物（NC膜或PVDF 膜）上，用抗靶蛋白的非標(biāo)記抗體（一抗）與轉(zhuǎn)印后膜上的靶蛋白進(jìn)行特異性結(jié)合，再與經(jīng)辣根過氧化物酶標(biāo)記（偶聯(lián)）的二抗結(jié)合，最后用ECL超敏發(fā)光液試劑檢測(cè)。如果轉(zhuǎn)印膜上含有靶蛋白，經(jīng)X 光片曝光、 顯影后，則會(huì)在X-光片上出現(xiàn)特異性蛋白條帶。

Western blot 實(shí)驗(yàn)分為三個(gè)部分：

1． 樣品蛋白質(zhì)的制備、 蛋白質(zhì)含量測(cè)定 2 SDS-聚丙烯酰胺凝膠電泳

3． 凝膠轉(zhuǎn)膜及其檢測(cè)

以提取細(xì)胞蛋白為例Western 印記雜交實(shí)驗(yàn)流程圖：

提取細(xì)胞總蛋白、測(cè)定含量

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制備SDS-PAGE 膠

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蛋白樣品變性、電泳

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電泳轉(zhuǎn)膜

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封閉

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一抗

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TBST 洗滌