PET系統(tǒng)：經(jīng)典的原核蛋白表達(dá)系統(tǒng)
說(shuō)到重組蛋白的表達(dá)，借鑒集體的智慧很重要，而發(fā)表技術(shù)進(jìn)展的著名期刊nature methods 是業(yè)內(nèi)廣為推廣的經(jīng)驗(yàn)之源。近期的一篇綜述（nature methods5,135-146）總結(jié)了來(lái)自14個(gè)進(jìn)行專業(yè)高通量重組蛋白表達(dá)的83個(gè)研究者的表達(dá)工作，推廣了他們?cè)谟糜诨蚬δ苎芯康牡鞍妆磉_(dá)方面的成功經(jīng)驗(yàn)。在目的基因克隆策略，選擇和優(yōu)化表達(dá)宿主，啟動(dòng)子，融合標(biāo)簽。純化方法等環(huán)節(jié)，已經(jīng)確立通用的重組蛋白表達(dá)策略，并在為數(shù)眾多的蛋白表達(dá)實(shí)踐中獲得了很好的效果。
在基因克隆階段，文章提及的14個(gè)實(shí)驗(yàn)室中有9個(gè)采用了NOVAGEN創(chuàng)新的LIC不依賴連接反應(yīng)的克隆方法（LIGATION-INDEPENDENT CLONING，詳情請(qǐng)參考右頁(yè)）。14個(gè)實(shí)驗(yàn)室中12個(gè)選擇了T7 RNA聚合酶控制的PET表達(dá)載體。表達(dá)宿主中常用的是BL21（DE3），一種帶有XDE3溶原的BL21細(xì)胞，其中LON和OMPT蛋白酶缺陷型有助于提高蛋白的穩(wěn)定性和產(chǎn)量。這些實(shí)驗(yàn)室都有用能夠補(bǔ)充稀有密碼子的ROSETTA DE3和TOSETTA 2DE3菌成功表達(dá)真核蛋白的經(jīng)驗(yàn)和報(bào)告。細(xì)胞裂解和樣本處理采用BENZONASE核酸酶和BUGBUSTER蛋白抽提試劑有利于提高蛋白產(chǎn)量和整體效果。而在細(xì)胞培養(yǎng)的發(fā)酵環(huán)節(jié)，自動(dòng)誘導(dǎo)培養(yǎng)基是高通量表達(dá)項(xiàng)目必備工具。NOVAGEN的OVERNIGHT EXPRESS 系列自動(dòng)誘導(dǎo)系統(tǒng)可以使細(xì)胞由生長(zhǎng)到表達(dá)不再需要加入IPTG等誘導(dǎo)劑。至于融合標(biāo)簽的選擇，目前還是HIS。TAG因相應(yīng)的IMAC純化方法（固定化金屬離子親和純化）最常用而在絕大多數(shù)蛋白表達(dá)時(shí)被選為融合標(biāo)簽。