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X-α-gal

發(fā)布人:浩然生物 瀏覽 11265次【字號(hào) 】 發(fā)布時(shí)間:2014年03月20日 打印本頁

X-α-Gal是一種酵母半乳糖苷酶 (MEL1) 的顯色底物,用于在培養(yǎng)基上直接檢測GAL4系統(tǒng)的酵母雙雜交作用。通過藍(lán)白顏色篩選,快速和簡便地識(shí)別陽性的藍(lán)色克隆,無需費(fèi)時(shí)的β-半乳糖苷酶報(bào)告基因檢測。      
X-α-Gal檢測酵母MEL1基因的激活,MEL1是GAL4酵母雙雜交系統(tǒng)的一個(gè)報(bào)告基因,編碼分泌型的α-半乳糖苷酶。該酶可水解無色的X-α-Gal底物并最終產(chǎn)生藍(lán)色產(chǎn)物。表達(dá)α-半乳糖苷酶的酵母菌落在含有X-α-Gal的培養(yǎng)基上顯藍(lán)色,即陽性的雙雜交作用。
用  途:
(1)α-半乳糖苷酶的顯色底物,形成藍(lán)色沉淀。在培養(yǎng)基上直接檢測酵母雙雜交相互作用,利用此底物可以省去雙雜交體系中的β-半乳糖苷酶溶液和filter-lift assays;
(2)用于區(qū)分腸桿菌科內(nèi)的不同菌種以及區(qū)分雙歧桿菌和乳酸菌;
(3)在組織化學(xué)中用于酶活性的檢測;
儲(chǔ)存液的配制及使用步驟:
A)涂布于預(yù)制平板:溶解24mg X-α-gal于6 mL DMF,終濃度為4mg/ mL的溶液。
①涂布200ul(15cm) 或者100ul(10cm)X-α-gal 儲(chǔ)存液于預(yù)制平板上;
②放于37℃培養(yǎng)箱至液體被吸收(由于DMF揮發(fā)性低,最長可放4小時(shí));
③將轉(zhuǎn)化細(xì)菌或酵母涂于平板上,于37℃或30℃培養(yǎng)直至藍(lán)色菌落出現(xiàn)。
B)直接加入瓊脂中:溶解60mg X-α-gal于3 mL DMF,終濃度為20mg/ mL的溶液。
①將已滅菌瓊脂培養(yǎng)基冷卻至50-55 ℃;
②往已冷卻的培養(yǎng)基中直接加入2 ml -10 ml 20 mg/ ml X-α-Gal儲(chǔ)存液,混勻,快速倒平板。
外  觀:白色或灰白色結(jié)晶粉末,或者無色結(jié)晶;
溶 解 度(1%甲醇溶液):無色,清澈;
儲(chǔ)  存:-15°C避光避潮保存;

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